تست ویتامین D3 که به آن تست 25 هیدروکسی ویتامین D نیز گفته می شود، آزمایشی است که مقدار ویتامین D را به فرم 25 هیدروکسی ویتامین D در جریان خون اندازه گیری می کند. برای ارزیابی میزان ویتامین D یک فرد، مخصوصاً برای اندازه گیری میزان ویتامین D3، که یکی از دو فرم اصلی ویتامین D است (دیگری ویتامین D2) انجام می شود. تست ویتامین D3 در موقعیت‌های مختلف همچون موارد زیر انجام می شود: ارزیابی مقدار ویتامین D: برای تعیین مقدار ویتامین D یک فرد، مخصوصاً زمانی که کمبود وجود دارد. مقدار پایین می‌تواند با بیماری‌هایی مانند پوکی استخوان، راشیتیسم یا بیماری‌های عمومی اسکلتی عضلانی همراه باشد. بررسی درمان: برای بررسی اثربخشی مکمل ویتامین D یا درمان کمبود ویتامین D. ارزیابی برخی از بیماری‌ها: مقدار ویتامین D می‌تواند در افراد مبتلا به بیماری‌هایی که می تواند بر متابولیسم ویتامین D تأثیر بگذارد، مانند بیماری کلیوی یا اختلالات سوء جذب، ارزیابی شود.